Nuevas perspectivas en el estudio de la piel y el moco de peces teleósteos.
Fuente:
Redalyc
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| Auteur principal: | |
|---|---|
| Format: | Artículo científico |
| Langue: | es |
| Publié: |
Universidad de Zaragoza
2017
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| _version_ | 1876460730589380608 |
|---|---|
| author | Héctor Cordero Muñoz |
| author_facet | Héctor Cordero Muñoz |
| contents | Nuevas perspectivas en el estudio de la piel y el moco de peces teleósteos. Héctor Cordero Muñoz Biología Piel Peces Mucus Proteoma Inmunología En la presente Tesis Doctoral hemos estudiado la piel y el moco de teleósteos con especial énfasis en la inmunidad de dorada y de lubina. Concretamente, nos hemos centrado en la caracterización de la piel con diferenciación dorsoventral, la respuesta inmune contra el principal virus en dorada (linfocistis), las condiciones óptimas de almacenamiento de moco para evaluar las actividades inmunes humorales, incluyendo la congelación (a -20ºC ó a - 80ºC) y la liofilización, y comparando con moco fresco; así como también en la caracterización del mapa proteómico del moco de lubina y los cambios producidos por la administración del probiótico Shewanella putrefaciens Pdp11, el estrés por hacinamiento y las variaciones producidas por heridas crónicas. Para este propósito, hemos desarrollado estudios de histología para analizar las piel a nivel óptico (incluyendo tinciones con hematoxilina-eosina, PAS y tricrómico de Mallory), y a nivel electrónico cuantificando por análisis de imagen las regiones dorsal y ventral, desarrollando un protocolo para aislar células de la piel en ambas regiones, así como viendo el perfil de expresión génica de nueve citoquinas (il1b, tnfa, il6, il7, il8, il15, il18, il10 y tgfb) en ambas regiones y los cambios frente al patógeno Photobacterium damselae ssp. piscicida, y el probiótico Pdp11. En el brote natural de linfocistis, la replicación del virus se estudió la replicación del virus por PCR anillada, la respuesta humoral (IgM, complemento y peroxidasa en suero), la respuesta humoral contra el virus fue estudiada a través de los niveles de IgM, el complemento y la peroxidasa en suero, la respuesta celular a través peroxidasa y explosión respiratoria en leucocitos de riñón cefálico, y la expresión de marcadores inmunes como ifn, irf3, mx, mhc2a, csf1r, ighm, tcra, hamp, il1b y nccrp1. Para estudiar las variaciones en la inmunidad humoral debido al almacenamiento del moco hemos evaluado proteínas totales, unión de lectinas a azúcares terminales, IgM, peroxidasa, lisozima, proteasa, antiproteasa, esterasa y fosfatasa alcalina, que son las principales actividades humorales que se evalúan habitualmente bajo distintos retos. Para estudiar los proteomas, realizamos la purificación de las proteínas de moco, separación de estas proteínas en 2- D usando la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE) e identificando esas proteínas luego a través de cromatografía líquida acoplada a espectrofotometría masas en tándem (LC-MS/MS). Finalmente, para el análisis bioinformático de los datos generados se utilizó el servidor MASCOT aprovechando las bases de datos de NCBI y SwissProt. En el caso de los proteomas diferenciales, se utilizó el programa PDQuest Advanced para detectar los spots diferencialmente expresados en los geles de dos dimensiones. Como resultados, en primer lugar la microscopía óptica y electrónica reveló una mayor superficie celular y área de microcrestas en la región dorsal, pero mayor grosor e 2017 otro 1578-4541 https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=49454648014 https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/ https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/html/ https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/49454648014.epub https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/movil es http://www.redalyc.org/revista.oa?id=494 AquaTIC application/pdf Universidad de Zaragoza AquaTIC (España) Num.48 |
| format | Artículo científico |
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| institution | Redalyc |
| language | es |
| publishDate | 2017 |
| publisher | Universidad de Zaragoza |
| spellingShingle | Nuevas perspectivas en el estudio de la piel y el moco de peces teleósteos. Héctor Cordero Muñoz Biología Piel Peces Mucus Proteoma Inmunología Nuevas perspectivas en el estudio de la piel y el moco de peces teleósteos. Héctor Cordero Muñoz Biología Piel Peces Mucus Proteoma Inmunología En la presente Tesis Doctoral hemos estudiado la piel y el moco de teleósteos con especial énfasis en la inmunidad de dorada y de lubina. Concretamente, nos hemos centrado en la caracterización de la piel con diferenciación dorsoventral, la respuesta inmune contra el principal virus en dorada (linfocistis), las condiciones óptimas de almacenamiento de moco para evaluar las actividades inmunes humorales, incluyendo la congelación (a -20ºC ó a - 80ºC) y la liofilización, y comparando con moco fresco; así como también en la caracterización del mapa proteómico del moco de lubina y los cambios producidos por la administración del probiótico Shewanella putrefaciens Pdp11, el estrés por hacinamiento y las variaciones producidas por heridas crónicas. Para este propósito, hemos desarrollado estudios de histología para analizar las piel a nivel óptico (incluyendo tinciones con hematoxilina-eosina, PAS y tricrómico de Mallory), y a nivel electrónico cuantificando por análisis de imagen las regiones dorsal y ventral, desarrollando un protocolo para aislar células de la piel en ambas regiones, así como viendo el perfil de expresión génica de nueve citoquinas (il1b, tnfa, il6, il7, il8, il15, il18, il10 y tgfb) en ambas regiones y los cambios frente al patógeno Photobacterium damselae ssp. piscicida, y el probiótico Pdp11. En el brote natural de linfocistis, la replicación del virus se estudió la replicación del virus por PCR anillada, la respuesta humoral (IgM, complemento y peroxidasa en suero), la respuesta humoral contra el virus fue estudiada a través de los niveles de IgM, el complemento y la peroxidasa en suero, la respuesta celular a través peroxidasa y explosión respiratoria en leucocitos de riñón cefálico, y la expresión de marcadores inmunes como ifn, irf3, mx, mhc2a, csf1r, ighm, tcra, hamp, il1b y nccrp1. Para estudiar las variaciones en la inmunidad humoral debido al almacenamiento del moco hemos evaluado proteínas totales, unión de lectinas a azúcares terminales, IgM, peroxidasa, lisozima, proteasa, antiproteasa, esterasa y fosfatasa alcalina, que son las principales actividades humorales que se evalúan habitualmente bajo distintos retos. Para estudiar los proteomas, realizamos la purificación de las proteínas de moco, separación de estas proteínas en 2- D usando la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato sódico (SDS-PAGE) e identificando esas proteínas luego a través de cromatografía líquida acoplada a espectrofotometría masas en tándem (LC-MS/MS). Finalmente, para el análisis bioinformático de los datos generados se utilizó el servidor MASCOT aprovechando las bases de datos de NCBI y SwissProt. En el caso de los proteomas diferenciales, se utilizó el programa PDQuest Advanced para detectar los spots diferencialmente expresados en los geles de dos dimensiones. Como resultados, en primer lugar la microscopía óptica y electrónica reveló una mayor superficie celular y área de microcrestas en la región dorsal, pero mayor grosor e 2017 otro 1578-4541 https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=49454648014 https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/ https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/html/ https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/49454648014.epub https://www.redalyc.org/journal/494/49454648014/movil es http://www.redalyc.org/revista.oa?id=494 AquaTIC application/pdf Universidad de Zaragoza AquaTIC (España) Num.48 |
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| topic | Biología Piel Peces Mucus Proteoma Inmunología |
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