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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Artículo científico |
| Language: | es |
| Published: |
Asociación Mexicana de Bioquímica Clínica, A.C.
2004
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| Subjects: | |
| Online Access: | https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57629103 |
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| _version_ | 1866558971728363520 |
|---|---|
| author | Juan Navarrete Castro |
| author_facet | Juan Navarrete Castro |
| contents | Clonación de una secuencia representativa de la región no traducible 5´ (5´-UTR) del virus de la hepatitis C Juan Navarrete Castro María de la Luz Martínez Rodríguez Nanancy Siria Torreblanca Gloria María Calderón Rodríguez Medicina UTR) PCR) clonación transcripción inversa Región no traducible 5´ (5´ El uso de técnicas moleculares como pruebas diagnósticas sehace imprescindible en nuestros días. Para poder tener un controlpositivo adecuado en la prueba cualitativa de RT-PCR parala detección del virus de la hepatitis C (VHC) se clonó una secuenciarepresentativa de la región altamente conservada notraducible 5´ (5´-UTR) del virus de la hepatitis C (VHC). Se seleccionóun paciente positivo al VHC por las pruebas diagnósticasde HCV EIA 3.0 y RIBA HCV 3.0 y con carga viral > 90,000copias de ARN/mL. Para la clonación de la secuencia representativade la región estudiada se obtuvo inicialmente ARNviral(ARNv) del VHC a partir del plasma del paciente seleccionado,utilizándose la técnica de transcripción inversa-reacción en cadenade la polimerasa (RT-PCR) y reacción en cadena de la polimerasa(PCR) anidada, se utilizaron iniciadores específicos de laregión, el KY-80 y KY-78/FIP y RIP obteniéndose un productode ADN de 214 pb (ADNi) el cual se insertó en el vector de clonaciónpGem-T, con el que se construyó el plásmido recombinantepGem-T-5´-UTR, el cual fue transformado en células deE. coli DH5α obteniéndose la línea celular E. coli DH5α pGem-T-5´-UTR como células clonas. A partir de las células clonas seobtuvo ADN (ADNp) del cual se amplificó la región 5´-UTR porPCR utilizándose los iniciadores FIP y RIP, obteniéndose unproducto de 214 pb el cual mostró ser eficiente como control positivoen la prueba del VHC por RT-PCR. 2004 artículo científico 0185-5751 https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57629103 es http://www.redalyc.org/revista.oa?id=576 Bioquimia application/pdf Asociación Mexicana de Bioquímica Clínica, A.C. Bioquimia (México) Num.1 Vol.29 |
| format | Artículo científico |
| id | redalyc_57629103 |
| language | es |
| publishDate | 2004 |
| publisher | Asociación Mexicana de Bioquímica Clínica, A.C. |
| spellingShingle | Clonación de una secuencia representativa de la región no traducible 5´ (5´-UTR) del virus de la hepatitis C Juan Navarrete Castro Medicina UTR) PCR) clonación transcripción inversa Región no traducible 5´ (5´ Clonación de una secuencia representativa de la región no traducible 5´ (5´-UTR) del virus de la hepatitis C Juan Navarrete Castro María de la Luz Martínez Rodríguez Nanancy Siria Torreblanca Gloria María Calderón Rodríguez Medicina UTR) PCR) clonación transcripción inversa Región no traducible 5´ (5´ El uso de técnicas moleculares como pruebas diagnósticas sehace imprescindible en nuestros días. Para poder tener un controlpositivo adecuado en la prueba cualitativa de RT-PCR parala detección del virus de la hepatitis C (VHC) se clonó una secuenciarepresentativa de la región altamente conservada notraducible 5´ (5´-UTR) del virus de la hepatitis C (VHC). Se seleccionóun paciente positivo al VHC por las pruebas diagnósticasde HCV EIA 3.0 y RIBA HCV 3.0 y con carga viral > 90,000copias de ARN/mL. Para la clonación de la secuencia representativade la región estudiada se obtuvo inicialmente ARNviral(ARNv) del VHC a partir del plasma del paciente seleccionado,utilizándose la técnica de transcripción inversa-reacción en cadenade la polimerasa (RT-PCR) y reacción en cadena de la polimerasa(PCR) anidada, se utilizaron iniciadores específicos de laregión, el KY-80 y KY-78/FIP y RIP obteniéndose un productode ADN de 214 pb (ADNi) el cual se insertó en el vector de clonaciónpGem-T, con el que se construyó el plásmido recombinantepGem-T-5´-UTR, el cual fue transformado en células deE. coli DH5α obteniéndose la línea celular E. coli DH5α pGem-T-5´-UTR como células clonas. A partir de las células clonas seobtuvo ADN (ADNp) del cual se amplificó la región 5´-UTR porPCR utilizándose los iniciadores FIP y RIP, obteniéndose unproducto de 214 pb el cual mostró ser eficiente como control positivoen la prueba del VHC por RT-PCR. 2004 artículo científico 0185-5751 https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57629103 es http://www.redalyc.org/revista.oa?id=576 Bioquimia application/pdf Asociación Mexicana de Bioquímica Clínica, A.C. Bioquimia (México) Num.1 Vol.29 |
| title | Clonación de una secuencia representativa de la región no traducible 5´ (5´-UTR) del virus de la hepatitis C |
| topic | Medicina UTR) PCR) clonación transcripción inversa Región no traducible 5´ (5´ |
| url | https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57629103 |