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| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Artículo científico |
| Sprache: | es |
| Veröffentlicht: |
Asociación Bioquímica Argentina
2016
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=65173060005 |
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Inhaltsangabe:
- Uso del inmunoblot (Western blot) en el laboratorio clínico para la detección de distrofina, disferlina y calpaína 3: tres proteínas de relevancia en el diagnóstico de miopatías hereditarias P. B. Sorroche M. Cucci M. Wilda M. Bettini M. I. Giménez S. Christiansen P. R. Grigera M. F. Ruggiero Medicina Distrofina disferlina calpaína 3 inmunoblot La ausencia y/o disfunción de 3 proteínas constitutivas del músculo, distrofina(UniProtKB - P11532) en el caso de las distrofinopatías y, disferlina(UniProtKB - O75923) y calpaina(UniProtKB - P20807) en las dis-trofias de cadera, juegan un papel central en la etiología de estas miopatías hereditarias. La confirmación de su presencia o ausencia en biopsias musculares es de relevancia diagnóstica y marca la necesidad de contar en el laboratorio clínico hospitalario con una técnica sensible y específica, que permita la detección e identificación de estas tres proteínas en nuestros de pacientes. El objetivo de este trabajo fue desarro-llar un protocolo de inmunoblot(Western blot, WB) adaptable al laboratorio de análisis clínicos hospitalario, para la detección de 3 proteínas constitutivas del musculo (distrofina, disferlina y calpaína 3) en material extraído de biopsias de pacientes. Aproximadamente 20 - 40 mg de biopsia muscular fue desnaturalizada en presencia de detergente SDS y mercaptoetanol por 10 minutos a 100°C y, posteriormente, analizadas en PAGE / SDS en formato mini-gel seguido de transferencia a membranas de nitrocelulosa e incubación con anticuerpos monoclonales(MAbs) con reactividad específica para las tres proteínas musculares men-cionadas y revelado cromogénico y/ o quimiolumínico. El protocolo presentado permite el análisis de un amplio rango de pesos moleculares que incluye a las 3 proteínas de interés: distrofina(430 Kd), disferli-na(250 Kd) y calpaína 3(95 Kd). La detección e identificación está basada tanto en la determinación del peso molecular relativo como en la reacción uníivoca con anticuerpos monoclonales específicos. En el caso de calpaína 3 la técnica es capaz de detectar e identificar fragmentos de auto procesamiento en el rango de 55 - 60 Kd, un dato indicativo, no sólo de la presencia y expresión del respectivo gen, sino también de la funcionalidad de su producto. Se discute la conveniencia de utilizar quimioluminiscencia o cromógenos en el revelado del WB. 2016 artículo científico 1515-6761 https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=65173060005 es http://www.redalyc.org/revista.oa?id=651 Bioquímica y Patología Clínica application/pdf Asociación Bioquímica Argentina Bioquímica y Patología Clínica (Argentina) Num.2 Vol.80