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| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Artículo científico |
| Sprache: | es |
| Veröffentlicht: |
Universidad Nacional de Colombia
2017
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=77652900006 |
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Inhaltsangabe:
- Evaluación de diferentes métodos de extracción de ARN a partir del hongo nativo Xylaria sp. Jhon Felipe Sandoval-Pineda Francisco Manuel Ochoa-Corona Esperanza Torres-Rojas Biología RT PCR tubulina Ascomicetes liofilización La extracción de ARN de calidad constituye el primer paso para el análisis de la expresión génica. Sin embargo, su obtención no es sencilla debido a la susceptibilidad de esta molécula a la presencia de contaminantes como ARNasas, proteínas y polisacári dos . Adicionalmente, debido a la diversa composición de la pared celular de los hongos se requiere optimizar los procesos de extra c- ción de ARN para organismos específicos. Este estudio evalúo el uso de diferentes metodologías de homogeneización de tejido (nitrógeno líquido y liofilización) y extracción de ARN (Trizol, CTAB y RNeasy mini kit) a partir del hongo nativo ascomiceto Xyla- ria sp. Se determinó la pureza, concentración e integridad del ARN obtenido por medio de espectrofotometría y electroforesis. Adicionalmente, se diseñaron cebadores de referencia para el gen β - Tubulina a partir del alineamiento de secuencias de este gen obtenidas de diferentes ascomicetes. Estos cebadores fueron utilizados para evaluar si el ARN extraído es amplificable median te RT - PCR. Se determinó que la homogeneización de tejido por medio de liofilización generó mayores rendimientos de extracción independientemente del protocolo de extracción utilizado; sin embargo, éstos alteraron la integridad del ARN. Se obtuvo un AR N con mayor pureza con el protocolo CTAB y un mayor rendimiento con el RNeasy mini kit. Los resultados indican que el ARN ex- traído, independientemente de la metodología de homogeneización y extracción utilizada, es amplificable mediante RT - PCR. No obstante, se recomienda homogeneizar el tejido con nitrógeno líquido y extraer con RNeasy mini kit por la brevedad del protoc o- lo de extracción y calidad obtenida. 2017 artículo científico 0123-3475 https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=77652900006 es http://www.redalyc.org/revista.oa?id=776 Revista Colombiana de Biotecnología application/pdf Universidad Nacional de Colombia Revista Colombiana de Biotecnología (Colombia) Num.1 Vol.XIX