Saved in:
| Main Authors: | , , |
|---|---|
| Format: | Recurso digital |
| Language: | |
| Published: |
Zenodo
2024
|
| Online Access: | https://doi.org/10.5281/zenodo.13911275 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
Table of Contents:
- <p><em>Clavibacter insidiosus </em>(далее <em>C</em><em>mi</em>) является возбудителем бактериального увядания, приводящего к потере урожая кормовых культур. Бактериоз встречается во многих странах, в том числе и на территории Российской Федерации. При этом ввоз семенной продукции люцерны находится под строгим карантинным контролем в ряде стран. <span>Актуальностью работы стала оптимизация метода изоляции и идентификации бактериоза.</span></p> <p><span>Цель работы – апробация и выбор питательных сред для культивирования колоний</span><em> </em><em>Cmi</em>,<em> </em><span>полученных из зараженных экстрактов семян. Исследования проводили в 2024 году в ФГБУ «ВНИИКР».</span></p> <p><span>В работе оценивали пять полуселективных сред – </span>BCT, GYCA, MTNA, NCP-88 и TBY, а также шесть универсальных сред – King B, YPGA, YDC, R2A, ND <span>и YGM. Изоляцию бактерии проводили при трех температурных режимах – 21˚С, 23˚С и 25˚С. Также проводили изоляцию бактерии из семенных экстрактов люцерны с разным уровнем зараженности. Идентификация колоний проводилась с помощью ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) с праймерной системой </span>CIRS-1, CIRS-2, CIRS-3A <span>и с помощью масс-спектрометрии времени пролета (</span>MALDI-TOF). <span>Все этапы исследований проводили с использованием референтного штамма </span><em>Cmi</em>.</p> <p><span>По результатам работы оптимальными для изоляции оказались две среды – </span>YDC <span>и </span>YPGA <span>и температурный режим 21˚С. На выбранных средах колонии кремовые, круглые, глянцевые, с ровным краем, на 3-и сутки роста появлялся тёмный пигмент. Было установлено, что изоляция </span><em>Cmi</em><em> </em><span>из семян возможна в случае содержания в пробе бактерии в концентрации 1,4*10</span><sup>1 </sup><span>КОЕ/мл и выше, что соответствует пороговому циклу флуоресценции 30,5 при проведении ПЦР-РВ, и результату в 98% совпадения при проведении </span>MALDI-TOF-анализа колоний. Исследование подтвердило возможность получения чистой культуры <em>C</em><em>mi</em> <span>из семенного материала кормовых культур.</span></p> <p><span>Полученные нами результаты могут быть востребованы при решении практических задач, касающихся не только фитосанитарного контроля, но и определения видового состав бактериозов кормовых культур на обследуемых территориях РФ, создания коллекции фитопатогенных и сопутствующих бактерий для растений-хозяев возбудителя бактериального увядания.</span></p>